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无汞苏木色精-伊红染色液染色效果评价

发布日期:2012-05-17 14:14:06点击次数:2391

 

无汞苏木色精-伊红染色液染色效果评价
                      韩亚京
(北京大学第三医院消化病理室,北京100083)
目的:探讨无汞苏木色精-伊红染色液的应用价值。方法: 应用无汞苏木色精-伊红染色液对100张石蜡病理切片进行染色,染色后应用改良的HE染色效果量化评价系统进行评分,同时应用含汞得苏木色精-伊红染色液染色作为对照。结果:使用无汞的苏木色精-伊红染液染出的组织切片色彩深浅适度、红蓝对比鲜明、着色层次清晰、组织结构清晰易于观察,评分效果明显好于含汞HE染液。结论:1、无汞苏木色精-伊红染色液染色效果好于普通含汞的HE染色液。2、改良的HE染色效果量化评价系统对于病理学诊断具有很好的应用价值。
HE是最基本的也是最重要的病理学染色技术。HE切片质量的好坏会影响病理医生得以做出正确诊断,许多所谓的“疑难病理案例”大多数是由于制片质量差所造成的。在HE染色制片过程中染色是HE切片的关键,染色的好坏与苏木素、伊红的配制和染色方法以及温度、染液的pH值等有关[12],其中HE染液中是否含汞已经引起病理工作者的广泛关注,它不仅会影响工作者的身体健康、造成环境污染等,还会引起染色质量的问题,因此使用无汞的HE染液已经成为病理技术的发展方向。所以本文就无汞HE染液与手工配制含汞的HE染液进行染色质量方面的探讨。
1、材料与方法:
1.1 材料:收集不同病种的病理组织100例,10%福尔马林固定,常规石蜡包埋组织标本,制成45mm厚的切片。
1.2 试剂:无汞苏木色精-伊红染色液选用苏木色精伊红染色试剂盒(北京世济合力生物科技有限公司),含汞苏木色精伊红染色液参照经典Harris苏木素液手工配制。
1.3染色方法:取备用的石蜡切片,分为两组,每组在同一时间、同一染色条件下分别用上述二种染液进行染色对比实验。
1.4 结果判定:请多位具有多年诊断经验的病理医生观察,并参考改良的HE染色效果量化评价系统进行评分(表1)[3、4]。
 1.5 统计学处理:用SPSS11.0统计软件处理,采用方差分析及t检验,P<0.05时差异有统计学意义。
2、结果:1、对比观察发现无汞HE染液染出的组织切片色彩深浅适度、红蓝对比鲜明、着色层次清晰、组织结构清晰易于观察,应用改良的HE染色效果量化评价系统进行评分,无汞HE染液评分好于含汞HE染液(P<0.05)(表2),并在使用中具有明显优越性(表3)。
苏木素-伊红(HE)染液是病理工作者在病理制片工作中每天都要用到的,作为最基本的病理组织学染色技术,苏木素和伊红的好坏决定着细胞核和细胞浆的着色,从而也决定了一张切片的质量。然而HE染液尤其是苏木素染液在配制和使用过程中都会遇到一些问题[5]:例如加热时的温度、时间不易掌握也不安全、易出现沉淀物、使用期不长等,尤其是应用含汞的苏木色精染液不仅对人体有害、污染环境,同时在使用时染液表面容易出现金属氧化膜,从而污染切片影响制片质量,所以有许多工作人员试图改进配制方法,但还是存在一些不满意之处,针对这些问题,我们公司进行了一些改良并得到了较满意的效果。
我们使用北京世济合力生物科技有限公司生产的苏木色精伊红染色试剂盒为无汞的HE染液,研究发现使用无汞的HE染液染色效果明显好于含汞的HE染液,我们应用改良的HE染色效果量化评价系统进行评分,不仅可以对同一张切片进行量化评价,而且可以反馈染色液及制片质量的好坏。我们使用的苏木色精伊红染色试剂盒,其苏木色精染液通过独创的苏木色精醇溶液的控制氧化工艺,一步法获得氧化苏木色精单一产物和氧化剂残留物,氧化剂残留物以不溶物形式滤除,滤液以一定比例配合专用媒染液,充分混合制成。在使用过程中无氧化膜形成,既减少了对切片的污染,且费用比使用氧化汞低廉,无毒性,还能减少环境污染。伊红染色应以苏木素对细胞核染色程度为标准,以求达到对比鲜艳清晰,层次清楚。伊红溶液不仅着色力强,染色稳定,核对比明显,尤其对肌纤维、纤维结缔组织和胞浆内嗜酸性颗粒着色鲜艳[6]。染色效果评价发现,对比普通HE染液,无汞的HE染液染色效果不仅表现为整体对比及色彩色调的优势,具体到细胞核的着色能发现细胞核结构清晰,呈现为蓝色,并且伊红着色的细胞浆层次分明,着色鲜艳、美观。同时在长期的应用中发现苏木色精伊红染色液的稳定性更好,有效期更长。
 
 
 
表1:改良的HE染色效果量化评价标准

染色效果
3
2
1
总体效果
色彩深浅
适度
轻度偏倾
明显偏倾
红蓝对比
鲜明
欠鲜明
模糊
着色层次
清晰
欠清晰
单一
色调
柔和悦目
欠柔和
刺目
苏木色精染色效果
细胞核颜色
蓝色
蓝色或微蓝紫色
蓝黑色
核结构
清晰
欠清晰于
不清晰或墨水滴状
增生的内皮细胞的核仁
淡红色
蓝紫色
深蓝色
浆细胞胞核
淡蓝紫色
蓝色
深蓝色
酸性粘液
浅蓝色
蓝色
深蓝色
伊红染色效果
伊红的三个层次*
明显
欠清楚
无层次差异
一般细胞的胞质、肌纤维、胶原纤维
不同层次的红色
淡紫色
紫蓝色或深蓝色
浆细胞胞质
嗜双色(紫蓝色)
红色或蓝色
红色
总分
 
 
 

*伊红的三个层次:
     浅:一般细胞的胞膜、胞质、肌纤维、胶原纤维呈浅桃红色或淡红色;细胶原纤维呈浅红色;中:肌纤维呈深桃红色或红色;深:粗胶原纤维呈深红色;红细胞呈朱红色。
 
 
 
 
 
 
 
表2:染色效果评分比较

评分
含汞HE染液
HE染色试剂盒
1
26.5
29.1
2
27.3
29.5
3
24.4
29.1
4
25.1
29.5
5
26.2
29.7
平均分
25.9
29.38

     P<0.05 
 
表3:常规HE染液与苏木色精伊红染色试剂盒染色效果比较

 
含汞HE染液
HE染色试剂盒
苏木素染液颜色
紫蓝色
绛红色
苏木素染液有无沉淀
苏木素染液有无氧化膜
苏木素染液过滤情况
每周过滤
不用过滤
伊红染液颜色
欠鲜红
鲜红
平均染色时间
10min
5min
染色效果评分
25.9
29.38
平均使用时间
    

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