HID染色及CK20表达在胃癌诊断中的应用

发布日期：2012-05-17 14:09:07点击次数：1839

HID染色及CK20表达在胃癌诊断中的应用

张丹¹韩亚京²

（1.北京大学首钢医院消化科，北京，100144；2.北京大学第三医院消化病理室，北京）

目的：研究HID染色及CK20表达在胃癌诊断中的应用。方法：应用HID染色观察胃癌组织中的粘液分泌情况，同时应用免疫组织化学法研究胃癌组织中CK20的表达情况。结果：胃癌组织中HID的染色及CK20的表达阳性率与胃癌患者的性别、年龄、肿瘤大小、浸润深度及淋巴结转移无关(P>0.05)，而与肿瘤的分化有关(P<0.05)； HID染色的阳性率与CK20 的阳性表达不具有统计学意义相关性（P>0.05)；结论：1. HID染色提示大肠型肠化生与胃癌有密切关系；2.HID的染色及CK20的表达阳性率与胃癌组织的分化程度相关，HID染色和CK20联合应用有助于的胃癌的诊断及发展的判断。

关键词：CK20；HID染色；胃癌

　Evaluation of HID Staining and CK20 expression in the diagnosis of gastric cancer

　胃癌是常见恶性肿瘤之一，5年生存率仍低于20%[1]。胃癌的发生是一个涉及多基因改变的多步骤渐进过程。由于胃癌的病因尚不十分清楚，因此实施针对病因的一级预防比较困难。胃黏膜异型增生和肠化生属于胃癌前病变，其与胃癌发生之间的关系是当今病理学研究的热点，无论是胃癌组织中，还是癌旁的化生组织中，粘液染色均可对诊断提供帮助。我们应用HID染色及CK20研究胃癌发生、发展情况，探讨其与胃癌的临床特征及生物学行为之间的关系。

一、病例及方法

1、病例选择：收集2006年1月～2010年7月临床资料较完整的胃癌常规石蜡包埋组织标本23例（胃粘液癌、管状腺癌等），其中男16名，女7名，年龄46岁～91岁，平均年龄70岁；高分化腺癌5例，中分化腺癌7例，低、未分化腺癌11例；同时选用20例正常胃活检标本作为对照。

2、方法与材料：

2.1粘液组化染色：组织用10%福尔马林固定，石蜡包埋，制成4μm厚的切片，分别进行常规HE染色，粘液染色试剂盒II (北京世济合力生物科技有限公司)进行HID染色。HID阳性反应的定位：大肠型肠化生的杯状细胞与柱细胞的细胞缘；粘液细胞癌和腺癌细胞的胞浆。

2.2 CK20免疫组化：取存档蜡块 4μm连续切片，作免疫组化染色。染色步骤按PV-9000试剂盒说明书进行（北京中杉金桥生物技术有限公司），染色前均用高压修复组织抗原，用PBS代替一抗作阴性对照，CK20阳性结果判定：有棕褐色或棕黄色着色为阳性；无着色者为阴性。

3统计学处理：

用SPSS11.0统计软件处理，采用t检验、x²及相关性检验，P<0.05时差异有统计学意义。

表1：癌组织中HID与CK20的表达与胃癌的临床病理关系

项目统计	n 23	HID		CK20
		阳性	阴性	阳性	阴性
年龄（岁）	6 17	5(83.33) 1(16.67) 12(70.59) 5(29.41)		4(66.67) 2(33.33) 14(82.35) 3(17.65)
≤60
＞60
性别	16 7	11(68.75) 5(31.25) 6(85.71) 1(14.29)		13(81.25) 3(18.75) 5(71.43) 2(28.57)
男
女
肿瘤大小	8 11 4	7(87.5) 1(12.5) 9(81.82) 3(27.27) 2(50) 2(50)		8(100) 0 8(75) 3(25) 2(50) 2(50)
小于2cm
2-4cm
4cm以上
分化	5 7 11	1(20) 4(80) 6(85.71) 1(14.29) 10(90.91) 1(9.09)﹡		1(20) 4(80) 6(85.71) 1(14.29) 11(100) 0﹡
高
中
低
浸润深度局限于黏膜黏膜下、肌层	16 7	10(62.5) 6（37.5） 7(85.71) 0		11(68.75) 5(31.25) 7(100) 0
无转移转移	21 2	15(71.43) 6(28.57) 2(100) 0		16(76.19) 5(23.81) 2(100) 0

﹡p<0.01

表2、胃癌中HID与CK20表达的关系

CK20表达	HID染色		总计
CK20表达	HID(+)	HID(-)	总计
CK20(+)	15	3	18
CK20(-)	2	3	5
总计	17	6	23

r=0.407， p>0.05

二、结果：

1、HID染色及CK20的表达阳性率与胃癌的关系(表1)：粘液腺癌其粘液湖中单个腺体HID阳性，尤其是胃印戒细胞癌胞质中呈现HID阳性；癌旁肠化生及远离癌组织肠化生腺体中可以观察到不同程度HID阳性，而癌旁正常粘膜HID阴性。癌组织中HID染色及CK20阳性率与胃癌患者的性别、年龄、肿瘤大小、浸润深度及转移无关(P>0.05)，而与胃癌的分化有关(P<0.05)；随着癌分化程度的降低，HID染色阳性率亦增高，5例高分化腺癌中1例阳性(20%)；中、低分化18例都为阳性，阳性率均100%；P<0.05，差异有统计学意义。CK20 的阳性表达主要位于细胞质和细胞膜。癌组织中CK20的表达与胃癌患者的性别、年龄、肿瘤大小、浸润深度及转移无关(P>0.05)；而与胃癌的分化有关(P<0.05)。5例高分化腺癌中1例阳性(20%)；中分化腺癌7例中6例CK20表达为阳性，阳性率85.71%；低、未分化腺癌11例均为阳性，阳性率100%；P<0.05，差异有统计学意义；随着癌分化程度的降低CK20的表达而增强。癌组织浸润至黏膜下、肌层及淋巴结转移者HID染色及CK20表达均呈阳性 (100%)。

2、癌组织中HID染色阳性与CK20的表达不具有统计学相关性(P>0.05)(表2)。

3、正常对照中仅见正常胃粘膜上皮部分表达CK20，正常胃粘膜中HID染色均为阴性。

三、讨论：

胃粘膜肠化生是一种常见的病理现象，其与胃癌发生之间的关系是当今病理学研究的热点，研究发现含有大量硫酸化粘液的大肠型化生与胃癌关系密切，属于癌前病变[2、3]。在胃粘膜肠上皮化生与胃癌发生之间的关系研究中，粘液组织化学染色起着重要作用[4]。研究发现所有粘液细胞癌和部分腺癌HID反应阳性，说明此两型胃癌癌细胞皆含硫酸粘液，并提示它们的病理组织发生和胃粘膜大肠型肠化有关，不完全大肠型肠化比其它类型肠化细胞群更具有与胃癌相类似的生物学性质[5]。

本组研究提示：胃癌组织其癌细胞胞浆出现HID阳性，粘液腺癌其粘液湖中单个腺体HID阳性，尤其是胃印戒细胞癌中呈现HID强阳性，癌旁肠化生及远离癌组织肠化生腺体中可以观察到不同程度HID阳性，而癌旁正常粘膜HID阴性，提示肠化生与胃癌有密切关系。因此，如果在内窥镜粘膜活检块较小的情况下，同时进行HID染色，则有助于胃粘液细胞癌的诊断；HID染色对于具有粘液分泌的肿瘤，尤其在一些分化较低的肿瘤临床上无法区分诊断时，可以用HID染色作为辅助的诊断与鉴别诊断方法；同时HID染色反应了大肠化生与胃癌发生发展的关系，在早期检查中可以提示胃癌的风险，引起患者及医护人员的注意，密切随访。

CK20具有I型角蛋白的特征，但不与其它I型角蛋白的单抗发生交叉反应[6]。它仅在部分器官上皮细胞及一些特异表型的肿瘤中表达[7]，绝大多数其他人体组织(如肺脏、肝脏)呈阴性分布，因而它被广泛应用于肿瘤诊断的许多方面的研究[8]。

我们应用HID与CK20共同对胃癌组织进行染色观察，结果发现，应用HID染色发现大多数胃癌中存在HID染色阳性(78.26%)，并且随着癌分化程度的降低，HID染色阳性率增高；癌组织浸润至黏膜下、肌层者有7例均呈HID染色阳性，阳性率为85.71%。CK20在胃癌中有较高的表达(78.26%)，高于文献报道[9]，并且组织中CK20的强度随着癌组织分化程度降低而表达增强，显示CK20的表达可能与胃癌的分化程度有关。实验中发现虽然HID及CK20染色在肿瘤浸润深度及转移方面无统计学意义，但限于病例较少，并且所观察发现癌组织浸润至黏膜下、肌层及淋巴结转移者均呈阳性，提示HID染色及CK20对肿瘤生物学行为的判断值得更深入研究。结合以往研究我们发现同一腺体中既有酸性黏液分泌又有硫酸化粘液分泌，同时CK20有表达；但也有一些胃癌中CK20阴性表达，但也可发现HID染色阳性的细胞分泌硫酸化黏液，提示在一些粘液性肿瘤中，可以应用特殊

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