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幽门螺杆菌检测试剂盒（银染法）稳定性研究

发布日期：2012-05-17 14:07:36点击次数：1495

幽门螺杆菌检测试剂盒（银染法）稳定性研究

韩亚京1，张红娟2

（1北京大学第三医院消化科病理室，100191；2秦皇岛市第一医院化验室，066000）

文献来源：检验医学与临床2009年8月第6卷第15期：1259-1260.

摘要：【目的】：观察幽门螺杆菌检测试剂盒（银染法）（商品名：幽必现）的稳定性。【方法】 :将试剂盒分别保存于室温和-15~5℃环境中，抽样测定其特异性、精密性、灵敏度、批内差异、批间差异，根据检测结果评价幽门螺杆菌检测试剂盒的稳定性，并预测有效期。【结果】:幽必现在不同保存时间、不同保存温度、不同储运环境，其敏感性和特异性、批内不精密性差异均无统计学意义，而且均无批间差异。【结论】:幽必现具有良好的稳定性，有效期至少2年或2-3年。

关键词： 幽门螺杆菌；检测试剂盒；稳定性

幽门螺杆菌（Hp）感染的危害已经举世皆知，因此其检测方法也随之日趋重要。其检测方法有多种，分为侵入性和非侵入性两大类，各有优缺点^[1-3]。但是，其公认的金标准检测方法仍为warthin-starry的病理银染法，只是由于其技术难度而一直未产品化。北京世济合力生物科技有限公司研制的幽门螺杆菌检测试剂盒（即银染法）敏感、特异，不仅可用于幽门螺杆菌的诊断，还可用于疗效考核^[4]。为了解本试剂盒的稳定性，本文进行了实验观察。

1 材料和方法

1.1 试剂盒：为北京世济合力生物科技有限公司生产的幽门螺杆菌检测试剂盒（银染法）（商品名：幽必现），有效期为24个月，批号分别为060810、060910、061010。

1.2 标本：阳性标本：经快速尿素酶法及¹³C呼气试验检测Hp，两种方法均阳性病人胃组织标本的病理石蜡切片。反之，则为阴性标本。染色结果以半定量方式^[5]表示如下：

阴性：染色后样本组织内无阳性待检细菌出现。

阳性：染色后样本组织内可见胃粘膜表面及小凹内阳性待检细菌，半定量如下：

（+）轻度：胃粘膜表面及小凹内偶见阳性待检细菌；

（++）中度：胃粘膜表面及小凹内可见散在的阳性待检细菌，未聚集成簇；

（+++）重度：胃粘膜表面及小凹内可见大量阳性待检细菌，聚集成簇或片。

1.2 抽检^[6] ：从仓库抽检室温存放的批号060810试剂盒，于生产日期后0、6个月、12个月、24个月后分别对阳性标本30例、阴性标本30例进行检测，计算特异度、灵敏度；取阴阳性标本各10例，用该批号不同保存期的抽样产品对同一标本重复进行10次检测，所得结果为阳性符合率（即灵敏度，以数字表示，如1.0=100%），以计算批内不精密度等。

1.3 模拟寒冷天气下运输保存的检测：批号060810、060910、061010三批试剂盒在-15~5℃下存放7天，再存放于室温，分别对阳性标本30例、阴性标本30例进行检测，计算特异度、灵敏度；取阴阳性标本各10例，用三个批号产品对同一标本重复进行10次检测，所得结果为阳性符合率（即灵敏度，以数字表示，如1.0=100%），以计算批间不精密度等。

1.4 观察指标

1.4.1 灵敏度：阳性标本检测结果的阳性符合率。

1.4.2　特异度：阴性标本检测结果的阴性符合率。

1.4.3　批内差异：对同一标本重复检测 10次，观察检测结果的不一致性。用变异系数CV(%)表示。

1.4.4　批间差异：观察试剂盒批间差异。用变异系数CV(%)表示。

2 结果

2.1 抽检结果：抽检批号为060810试剂盒，其特异性、灵敏度、批内不精密度结果均符合《规程》的要求，如表1。从表1可知，试剂保存0、6个月、12个月、24个月，特异性、灵敏度、批内不精密度无差异。

表1：室温下不同保存时间对稳定性的影响

保存时间（月）	灵敏度（阳性符合率%）	特异度（阴性符合率%）	批内不精密度（%）
0	30/30（100%）	30/30（100%）	0
6	30/30（100%）	30/30（100%）	0
12	30/30（100%）	30/30（100%）	0
24	29/30（96.7%）	30/30（100%）	1.7

2.2 模拟寒冷天气下运输保存试验结果：三批试剂盒的检测结果见表3。

表2 ：三批试剂盒模拟寒冷天气下运输保存试验结果

保存时间（月）	060810 灵敏度	特异度	精密度	060910 灵敏度	特异度	精密度	061010 灵敏度	特异度	精密度
0	100%	100%	0	100%	100%	0	100%	100%	0
6	100%	100%	0	100%	100%	0	100%	100%	0
12	100%	100%	0	100%	100%	0	96.7%	100%	1.7
24	100%	100%	0	96.7%	100%	1.7	100%	100%	0

3 结论

3.1 试剂盒在不同保存时间其敏感性和特异性差异均无统计学意义。

3.2 试剂盒在不同保存温度条件下批内不精密性也无差别，即批内重现性好，准确度高。

3.3 试剂盒的批间差异：3个批号的试剂盒同等条件下检测结果敏感性和特异性相同，无批间差异，即批间重现性好。

3.4 实验证明幽必现的有效期至少是2年或2-3年。

4 讨论

试剂盒的稳定性是决定产品有效期、储存和运输条件的关键性因素，而且往往呈现相关关系。也就是说，稳定性越好，有效期越长，要求的储运条件也越低；反之，若稳定性较差，即使试剂的特异性和敏感度非常好，也无实用价值^[7]。因此，稳定性研究对于实验技术的产品化、商品化、产业化起着至关重要的作用。本文通过对不同储存时间、不同温度条件下及同一批内、不同批间灵敏度、特异度、精密度、批间差异的研究，明确了幽必现的稳定性情况，同时，也对该产品的有效期做了客观而有力地验证。

研究结果证实，幽必现在不同保存时间、不同保存温度、不同储运环境，其敏感性和特异性、批内不精密性差异均无统计学意义，而且均无批间差异。这就意味着该产品性能非常稳定，有效期长，对储运条件要求非常低；再加上技术本身的金标准检测手段的优势，我们完全可以得出结论：幽必现符合《规程》要求，在储存、运输、销售等流通过程中性能稳定，适合临床使用。

参考文献

[1] 李岩。幽门螺杆菌检测方法[J].中国实用内科杂志，2002，22 (1) :15.

[2] Hung CT，Leung WK，Chan FK，et al.Comparison of two new rapid serology tests for diagnosis of Helicobacter pylori in Chinese patients[J].Dig Liver Dis，2002，34(2):111.

[3] Leung WK，Chow TP，NC EKW，et al.Validation of a new immunoblot assay for diagnosis of Helicobacter pylori in the Asian population[J].Aliment Pharmacol Ther，2001，15 :423.

[4] 胡伏莲.对幽门螺杆菌若干问题的共识意见(中国).中华医学杂志，2004:84:522~523

[5] 周殿元。幽门螺旋菌与胃十二指肠疾病，上海科学技术文献出版社，1992.5.

[6] 中国生物制品规程[M].第6版.北京:化学工业出版社，2000.59~61.

[7] 唐伟国。医学检验诊断试剂的制备与应用[M].上海：上海科学技术文献出版社，1996.12-14.

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