南昌雨露实验器材有限公司

巴氏染色液使用说明书

Papanicolaou’s Stain Manual

【性状与成分】

本品由苏木精染液（A液）、EA36染液（B1液）或EA50染液（B2液）、橘黄G染液（C液）构成。苏木精染液为深紫红色澄明液体，有乙酸刺激性气味，主要成分为苏木精色素经氧化生成的三氧化苏木红；EA36染液为墨绿色液体，有微量沉淀，具有乙醇特异芳香气味，主要由亮绿、俾士麦棕、伊红Y、磷钨酸、碳酸锂、乙醇、蒸馏水组成；EA50染液为墨绿色液体，有微量沉淀，具有乙醇特异芳香气味，主要由亮绿、伊红Y、甲醇、冰醋酸、磷钨酸、乙醇、蒸馏水组成；橘黄G染液为橘黄色澄明液体，有乙醇特异芳香气味，主要由桔黄G、磷钨酸、乙醇、蒸馏水组成。

【原理与用途】 

本品为染色液，适用于各种脱落细胞的形态观察前的染色（涂片染色）。细胞中的细胞核是由酸性物质组成，它与碱性染料苏木素氧化物三氧苏木红的亲和力较强，而细胞浆则相反，因含有碱性物质而与酸性染料亮绿、俾士麦棕、伊红Y、橘黄G表现不同的亲和力；经巴氏染色后，细胞核被染成紫蓝色，细胞浆、肌纤维、胶元纤维等染成蓝绿色、淡蓝或淡绿色、粉红色或桔黄色等不同的颜色。 

【使用方法】

1. 将涂片置于95%乙醇中固定15 分钟以上；

2. 依次浸入80%、50%乙醇中各30 秒，水洗1～2分钟，甩干；

3. 浸入苏木精染液中3～5分钟，水洗1～2分钟，甩干；

4. 浸入盐酸酒精分化液中分化数秒，水洗1～2分钟，甩干；

5. 浸入返蓝液中数秒，水洗1～2 分钟，甩干；

6. 置于95%乙醇中漂洗，水洗甩干；

7. 浸入橘黄G染液中染1～3分钟；95％乙醇、95％乙醇、无水乙醇中漂洗各1次，时间各10～20秒；

8. 浸入EA36染液(或EA50染液)中染色2～5分钟，95％乙醇、95％乙醇、无水乙醇中漂洗各1次，时间各10～20秒；

9. 浸入浸蜡脱蜡透明液中2分钟；

10. 中性树胶封固，镜检。

【染色结果】

上皮细胞：胞核呈紫蓝色，核仁红色；胞质染色随分化程度和细胞类型不同可染成蓝绿色、粉红色或桔黄色；红细胞：鲜红色或橙红色。白细胞：胞核蓝紫色，胞质淡蓝或淡绿色；粘液：淡蓝或粉红色。

【注意事项】

1. 使用场所应通风，并远离火源；涂片厚薄适宜，固定后方可染色；制片用高于95％以上浓度的乙醇固定后会出现染色过深，应用95％乙醇固定；

2. 苏木精染液上有一层金属膜，下有结晶沉淀，使用前应用滤纸过滤；苏木精染液在染够2000～3000张玻片后应更换新的染液；苏木精的染色时间随气温和染液情况而改变；染液以覆盖涂片为宜，过少因蒸发导致染料沉淀；

3. 盐酸酒精分化的作用为分化掉胞浆上沾上的苏木素，因此时间不宜长，但如果分化不够，会造成细胞核颜色过深或（及）胞浆很难上色；分化后立即用自来水冲洗，不宜久置，否则可使全部颜色消失；

4. 返蓝亦称碱化，返蓝时间偏短则着色不充分，影响染色效果，碳酸锂每缸过500张玻片更新；

5. 橘黄G染色时间不宜过长，否则EA50不易上色；橘黄每缸过1000张玻片更新；

6.  EA50或EA36使用前要充分搅拌，染色过程中提拿、旋转染色架数次。每缸过1000～1800张玻片后更新；

7. 技术人员操作要流畅，动作干净利落，不可把上一缸染色液带入下一缸，每缸交替时要甩干玻片上残存液体。

8. 细胞浆着色不佳应考虑的因素

8.1 如果全片内胞浆都淡染，则需延长染色时间或更换新液；

8.2 如果胞浆不分色或均为浅红色，适当增加染色时间能够部分纠正不分色状况；

8.3 胞浆染成灰色或紫色是由于苏木素染色时间过长或盐酸酒精分化不佳，经过褪色后重新苏木素染色可以纠正；

8.4 由于标本的不同，同样配方的EA染液可造成偏蓝、偏绿和偏红，对不同的标本应使用不同的EA染液，一般认为：EA36和EA50较适用于妇科标本，而EA65或改良EA较适用于非妇科标本；

8.5胞浆不分色的另一重要原因是由于EA染液的pH值不恰当所致。如染色为红色，可加少许磷钨酸溶液纠正；如染色均为蓝色或绿色，可加少许饱和碳酸锂溶液纠正。对于改良EA染液，每100ml染液加入2ml冰醋酸后染色效果更佳，染液使用更持久。

9. 细胞核着色不佳应考虑的因素

9.1细胞核着色过浅

盐酸分化时间过长或苏木精染色液使用时间过长，需要缩短分化时间或延长碱化时间；苏木精染色液缸中每日加入少量新鲜苏木精染液；

9.2细胞核着色过深

盐酸溶液浓度不够，适当加入几滴盐酸以增加浓度；返蓝时间过长，则可缩短返蓝时间或用水充分漂洗。

【规    格】  100mL/瓶；500mL/瓶；1000mL/瓶

【储    存】  密封，阴凉处保存

【有 效 期】  未开封条件下储存，有效期1年

【注册证号】  赣洪食药监械（准）2011第1400086号

【产品标准】  YZB/赣洪00869-2011《巴氏染色液》

【生产企业】

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