在Western Bloting实验中,可能存在总蛋白浓度测定不准确,或者蛋白质样品在电泳前上样时产生的样品间的操作误差;这些误差可以通过测定每个样品中实际转到膜上的内参,比如内参GAPDH的含量来进行校正。当然除了GAPDH抗体,β-Actin抗体、β-Tubulin抗体等也是最常见的内参抗体。GAPDH(甘油醛-3-磷酸脱氢酶)是参与糖酵解的一种关键酶,由4个30-40kDa的亚基组成,分子量146kDa,检测条带大约在36kDa。GAPDH基因几乎在所有组织中都高水平表达,广泛用作Western blot蛋白质标准化的内参。
选择合适的GAPDH抗体显得尤为重要,首先GAPDH的WB检测条带大约为36kDa,因此对于一些待检测分子量大于40kDa或者小于30kDa的目的蛋白尤为合适。一般来说,国产的抗体在质量稳定性、效价等方面存在不足,但是进口品牌如Abcam、Millipore、CST等价格偏高,一般在¥3000/100ul左右。下面我们为您推荐三款GAPDH原装进口抗体,分别是美国EarthOx和ProteinTech的产品。EarthOx的Anti-GAPDH Monoclonal Antibody(货号E021010)是小鼠源的单抗,其效价很高,厂商推荐的WB起始稀释比率为1:1000,实际应用过程中,有使用1:10000或更高的报告,远远高于此稀释比率,说明其免疫效价很高,另外,其检测种属也很多,包括人、牛、猪、小鼠、大鼠等。右图为EarthOx的Anti-GAPDH Monoclonal Antibody(货号E021010)在不同细胞系内WB的检测结果。
货号 | 品牌 | 品名 | 来源 | 应用类型 | 特点 | 说明书 |
E021010 | EarthOx | Anti-GAPDH Monoclonal Antibody | 小鼠 | WB, IF | 效价极高,检测种属多 | |
10494-1-AP | ProteinTech | GAPDH Polyclonal Antibody | 兔 | WB, ELISA | 兔源 | |
60004-1-Ig | ProteinTech | GAPDH Monoclonal Antibody | 小鼠 | WB, ELISA, IHC, IF |
应用类型多
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ProteinTech的GAPDH Polyclonal Antibody(货号10494-1-AP)则是一款兔源多克隆GAPDH抗体,对于需要兔源GAPDH抗体的客户则是一个不错的选择。同样,ProteinTech的GAPDH Monoclonal Antibody(货号60004-1-Ig)则是另一款单克隆抗体,除了WB和IF外,还可以应用于免疫组化IHC等实验。需要注意的是IF也是GAPDH抗体常用的应用类型之一。左图为ProteinTech的GAPDH Monoclonal Antibody(货号60004-1-Ig)抗体在石蜡包埋、福尔马林固定的切片上的应用。