Kapa2G超强PCR试剂盒是经过了基因工程改造出的第二代DNA多聚酶，其特点是超强型，稳定性,和特异性。处于同行业领先地位，不仅适用于常规的PCR反应中，更适合于用普通PCR难于扩增出的样品。扩增出的片段可以直接用于下游的实验，例如：酶切，克隆，测序等等。和普通的Taq聚合酶一样，Kapa2G超强DNA聚合酶具有5'到3'的多聚酶和外切酶的功能，但不具备3'到5'的外切酶功能（也就是校正功能)。因此Kapa2G超强DNA聚合酶具有和常规的Taq酶一样的保真程度。试剂盒中含有2种专用的增强液，以及2种高产量的缓冲液，因此，为您提供了充足的选择来优化PCR条件，让你得到理想的PCR扩增产物。同时，常见的PCR添加物（例如，DMSO,betaine,和BSA)可以和超强PCR聚合酶同时存在。反应体积不超过25ul。使用超强PCR试剂盒，可以扩增出长至6kb的片段。

 

Kapa2G超强PCR适用范围包括：

●   可用于普通的PCR反应中

●   AT和GC碱基含量高 的扩增

●   模板中含有常见的PCR反应抑制物，例如，盐离子，尿素，SDS,乙醇，EDTA等

●   石蜡油包被样品

●   粪便等样品

●   菌落PCR

 

      Kapa2G超强PCR和普通Taq酶的比较。扩增的产物的GC含量不等（28-84%),片段大小不等（0.1到1kb)。通过不同的组合，Kapa2G超强PCR能够扩增出所有的18个基因片段：其中8个是通过缓冲液A(A),6个是通过缓冲液A加上增强液1(AE1),或者缓冲液B加上增 强液2（BE1),2个是通过缓冲液B,加上增强液2（BE2),2个GC含量超过80%的片段是通过 缓冲液B加上增强液1，再加上5%的DMSO来成功扩增出来的。相反的，使用普通的Taq聚合酶只能扩增出其中的9个片段。所有反应中都是在25ul的反应体积中进行，含有20ng的人基因组DNA作为模板，0.5units的聚合酶，退火温度60ºC,共进行35个循环。

　 

   在常见的PCR反应抑制剂存在的情况下，和竞争产品P和T相比较，Kapa2G超强PCR聚合酶仍然能成功地扩增出目的基因片段。上图中的反应是在25ul中，以1pg的质粒DNA为模板，扩增的目的片段是1.5kb,同时存在不同的PCR抑制物。在尿素（Urea)存在时，使用缓冲液A；在NaCl和乙醇（ethanol)存在时，使用缓冲液B;在SDS存在的情况下，使用缓 冲液B和增强液1。

　

   可能你在使用菌落PCR的时候，由于一些PCR抑制物的存在，使PCR反应常常失败。因此，前面讲到的Kapa2G超强聚合酶对抑制物的忍耐性，带来的直接好处就是保证你从菌落中100%的得到扩增片段。上图中，Kapa2G超强PCR从不同的大肠杆菌中扩增出的2.7kb片段,并和竞争产品（N,T)的比较。从菌落中挑一个克隆，并稀释于PCR级别的水中，并从中取1ul作为模板来扩增目的基因。Kapa2G超强PCR使用的是缓冲液B。

 

   使用Kapa2G超强PCR聚合酶和N公司普通Taq的比较，其中左边扩增出的片段是5kb的噬菌体DNA,右边是2.7kb的人基因片段。模板经过10倍的稀释。

  

实验方法：

●    建议总的反应体积在10-25ul,但你也可以增加到50ul

●    所有操作在冰上进行，反应容器可以在薄壁的PCR管子里或者PCR板上

   

反应混合物的准备：

注意事项：

1.  当总的反映体积不是25ul的时候，请按照最终体积来按比例改变每种试剂的用量。

2.  当反应总体积超过50ul的时候，建议准备一个总的反应混合物，然后分装到几个管子中去，每个管子的体积是25ul。

3.  每25ul体积中，加入0.5 unit的Kapa2G超强DNA多聚酶。如果发现有高背景或者反应条带模糊的情况发生，请酌情减少酶的用量。如果有PCR抑制物存在，可以适当增加酶的用量。

4.  所有的Kapa2G PCR缓冲液中都含有镁离子（1.5mM)

5.  如果你购买的试剂盒里含有上样染料，请不要担心染料会对你的实验结果产生任何影响。由于这些染料都是惰性的，不会和任何试剂发生反应。这些染料的目的是帮助你在PCR结束后，可以直接上样，为你节省时间。

6.  无论你使用哪一种增强剂 （KapaEnhancer1 或者2），请记住他们的终浓度是1X的。你可以在一个反应中同时使用两种增强剂。同时，常用的PCR添加物，例如DMSO,betaine,BSA,的使用，不会造成对酶的影响。

 

 缓冲液和增强液的使用：

    试剂盒中含有两种缓冲液：A和B。其中A液适用于扩增片段小于2kb,B液适用于大于2kb片段的PCR反应。如果出现非特异性的引物结合情况，或者扩增比较困难的时候，可以使用B液。高AT含量的片段（>2kb),请使用A液。试剂盒中同时包括有两种增强液1和2(Enhancer 1 and 2)。前者是5X,后者是25X。但最终的浓度都应该是1X。使用增强液与否，取决于扩增的难易程度，其效果也会因为实验不同，而表现出不同的效果。所以，第一次使用Kapa2G超强PCR的时候，我们建议你比较一下，单独使用缓冲液，和联合使用缓冲液和增强液的结果。

　

循环参数的设定：

        3步反应的参数（适用于退火温度在45到65度的引物）

                 
        2步反应的参数（适用于退火温度在65到72度的引物）

关于循环参数的注意事项：

1.  对于复杂的模板（高GC含量，或者有二级结构），可以增加变性时间。

2.  对于菌落PCR,请使用所推荐的最高的变性温度和最长的时间。

3.   如果有模糊条带和背景很高的情况出现，就是短延伸时间到30秒/kb,或者降低循环的参数（例如，5次，10次等）。 对于高AT的模板，延伸温度可以降低到68度。

4.   如果你认为引物的特异性是个问题，那么就在冰上完成反应混合物的准备，同时手工让PCR仪器热启动，当仪器的温度达到95度时，再将装有反应液的管子放入PCR仪中，以此来降低非特异条带的扩增。

 

订购信息： 

Code	Description	Kitcontents
KK5522	KAPA2G Robust HotStart DNA Polymerase (100 U)	100 units, 5 U/µL. Supplied with 5X KAPA2G Buffer A, 5X KAPA2G Buffer B, 5X  KAPA2G GC Buffer (all with Mg2+ at a 1X conc. of 1.5 mM), 5X KAPA Enhancer 1 and extra MgCl2 (25 mM).
KK5532	KAPA2G Robust HotStart DNA Polymerase with dNTPs (100 U)	100 units, 5 U/µL. Supplied with 5X KAPA2G Buffer A, 5X KAPA2G Buffer B, 5X KAPA2G GC Buffer (all with Mg2+ at a 1X conc. of 1.5 mM), 5X KAPA Enhancer 1,  10 mM dNTP Mix and extra MgCl2 (25 mM).
KK5515	KAPA2G Robust HotStart DNA Polymerase (250 U)	250 units, 5 U/µL. Supplied with 5X KAPA2G Buffer A, 5X KAPA2G Buffer B, 5X KAPA2G GC Buffer (all with Mg2+ at a 1X conc. of 1.5 mM), 5X KAPA Enhancer 1 and extra MgCl2 (25 mM).
KK5516	KAPA2G Robust HotStart DNA Polymerase with dNTPs (250 U)	250 units, 5 U/µL. Supplied with 5X KAPA2G Buffer A, 5X KAPA2G Buffer B, 5X KAPA2G GC Buffer (all with Mg2+ at a 1X conc. of 1.5 mM), 5X KAPA Enhancer 1,  10 mM dNTP Mix and extra MgCl2 (25 mM).
KK5517	KAPA2G Robust HotStart DNA Polymerase (500 U)	500 units, 5 U/µL. Supplied with 5X KAPA2G Buffer A, 5X KAPA2G Buffer B, 5X KAPA2G GC Buffer (all with Mg2+ at a 1X conc. of 1.5 mM), 5X KAPA Enhancer 1  and extra MgCl2 (25 mM).
KK5518	KAPA2G Robust HotStart DNA Polymerase with dNTPs (500 U)	500 units, 5 U/µL. Supplied with 5X KAPA2G Buffer A, 5X KAPA2G Buffer B, 5X  KAPA2G GC Buffer (all with Mg2+ at a 1X conc. of 1.5 mM), 5X KAPA Enhancer 1, 10 mM dNTP Mix and extra MgCl2 (25 mM).
KK5525	KAPA2G Robust HotStart DNA Polymerase (2,500 U)	2500 units, 5 U/µL. Supplied with 5X KAPA2G Buffer A, 5X KAPA2G Buffer B, 5X KAPA2G GC Buffer (all with Mg2+ at a 1X conc. of 1.5 mM), 5X KAPA Enhancer 1 and extra MgCl2 (25 mM).
KK5701	KAPA2G Robust HotStart ReadyMix (100 rxn)	100 x 25 µl reactions. Convenient 2X master mix containing KAPA dNTPs, reaction buffer, and Mg2+ at a 1X final conc. of 2.0 mM. Just add template and primers.
KK5702	KAPA2G Robust HotStart ReadyMix (500 rxn)	500 x 25 µl reactions. Convenient 2X master mix containing KAPA dNTPs, reaction buffer, and Mg2+ at a 1X final conc. of 2.0 mM. Just add template and primers.