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细胞传代培养

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详细信息
  • 细胞传代培养

     

    一、原理
    细胞在培养瓶长成致密单层后,已基本上饱和,为使细胞能继续生长,同时也将细胞数量扩大,就必须进行传代(再培养)。
    传代培养也是一种将细胞种保存下去的方法。同时也是利用培养细胞进行各种实验的必经过程。悬浮型细胞直接分瓶就可以,而贴壁细胞需经消化后才能分
    瓶。
    二、材料和试剂
    1
    、细胞:贴壁细胞株
    2
    、试剂:0.25%胰酶、1640培养基(含10%小牛血清)
    3
    、仪器和器材:倒置显微镜,培养箱、培养瓶、吸管、废液缸等
    三、操作步骤
    1
    、将长满细胞的培养瓶中原来的培养液弃去。
    2
    、加入0.51ml 0.25%胰酶溶液,使瓶底细胞都浸入溶液中。
    3
    、瓶口塞好橡皮塞,放在倒置镜下观察细胞。随着时间的推移,原贴壁的细胞逐渐趋于圆形,在还未漂起时将胰酶弃去,加入10ml培养液终止消化。
    观察消化也可以用肉眼,当见到瓶底发白并出现细针孔空隙时终止消化。一般室温消化时间约为13分钟。
    4
    、用吸管将贴壁的细胞吹打成悬液,分到另外两到三瓶中,实践培养液塞好橡皮塞,置37
    下继续培养。第二天观察贴壁生长情况。
    附:消化液配制方法:
    称取0.25克胰酶蛋白酶(活力为1250),加入100mlCa2+Mg2+Hanks液溶解,滤器过滤除菌,4
    保存,用前可在37下回温。
    胰酶溶液中也可加入EDTA,使最终浓度达0.02%。

    本平台常期承接:
           慢病毒,腺病毒,RNAi类,细胞生物学整体实验,骨髓间充质干细胞培养、心肌细胞培养,蛋白组学类(iTRAQ),裸鼠成瘤类,分子生物学类,抗体制备类,芯片类,病理类,整体课题等各项实验技术服务。
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