N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)是存在于细胞溶酶体内的一种水解酶,尿中NAG主要来自肾近曲小管上皮细胞,但健康人尿中含量甚微。尿NAG活性水平的增高,是早期肾损伤和糖尿病微血管病变的敏感指标。NAG活性可用于肾小管间质性肾炎、尿路感染、糖尿病肾病综合症、高血压肾病、肾移植后的排异反应和肾病综合症的早期诊断。上述疾病时NAG活性的升高均早于其他相应指标,有利于疾病的早期发现和及时治疗。NAG活性还可用于重金属等肾毒性物质环境污染的人群筛查、职业病调查等。
MPT-NAG是新型NAG底物,测定原理:
NAG催化6-甲基-2-硫代吡啶-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷(MPT-NAG)水解,生成产物6-甲基-2巯基吡啶(MPT),MPT在340nm处有强烈,通过测定340nm处每分钟的吸光度增加速度计算NAG的活力。
PNP-NAG检测原理:
在第一反应中用己糖激酶(HK)消去血清中内源性葡萄糖的影响,在第二反应中,NAG作用于基质P-硝基苯酚-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷(PNP-NAG),生成N-乙酰氨基葡萄糖,此N-乙酰氨基葡萄糖在N-乙酰氨基葡萄糖氧化酶(NAGOD)的作用下生成H2O2。此H2O2在过氧化物酶(POD)的作用下与高灵敏的发色剂双〔3-双(4-氯酚)甲基-4-二甲氨苯基〕胺(BCMA)反应,生成绿色色素。通过测定此色素可求得NAG的活力。
第一反应:
HK
葡萄糖 + ATP ─────────→ 葡萄糖-6-磷酸 + ADP
第二反应:
NAG
PNP-NAG + H2O ──────→ N-乙酰氨基葡萄糖 + p-硝基苯酚
NAGOD
N-乙酰氨基葡萄糖 + O2 + H2O ───→ N-乙酰氨基葡萄糖酸 + H2O2
POD
H2O2 + BCMA + H+ ────→ 绿色色素 + 2H2O
临床意义:
1、 早期肾损伤和糖尿病微血管病变诊断
2、 肾小管间质性肾炎早期诊断
3、 尿路感染早期诊断
4、 糖尿病肾病综合症早期诊断
5、 高血压肾病早期诊断
6、 肾移植后的排异反应早期诊断
7、 肾病综合症的早期诊断
8、 重金属等肾毒性物质环境污染的人群筛查、职业病调查等。
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