慢病毒构建、包装、纯化、鉴定

1、慢病毒的简介： 慢病毒的简介： 慢病毒的简介： 慢病毒的简介：
Lentivirus 是逆转录病毒 的一种，具有逆转录病毒基本结构和特性；能整合入宿主 细胞基因组，长期表达可用于转动物制备；但也有不同逆录病毒的分和特性比逆转录病毒具有更高的滴度，不仅可以感染分裂细胞重要是还能非。 比逆转录病毒具有更高的滴度，不仅可以感染分裂细胞重要是还能非。 比逆转录病毒具有更高的滴度，不仅可以感染分裂细胞重要是还能非。 利用 Lentivirus 构建的 shRNA 表达载体，与化学合成的 表达载体，与化学合成的 siRNA 和基于瞬时表达载体构 建的 shRNA 相比， 一方面可以替代后者另Lentivirus -shRNA 载体经包 装系统装后，可用于感染依靠传统转试剂难的细胞（如原代、悬浮等），并且在 装后，可用于感染依靠传统转试剂难的细胞（如原代、悬浮等），并且在 感 染后可以整合到受细胞的基因组，进行长时间稳定表达 是制备细胞的基因组，进行长时间稳定表达 是制备细胞的基因组，进行长时间稳定表达 是制备细胞的基因组，进行长时间稳定表达 是制备细胞的基因组，进行长时间稳定表达 是制备细胞的基因组，进行长时间稳定表达 是制备细胞的基因组，进行长时间稳定表达 是制备细胞的基因组，进行长时间稳定表达 是制备细胞的基因组，进行长时间稳定表达 是制备细胞的基因组，进行长时间稳定表达 是制备细胞的基因组，进行长时间稳定表达 是制备细胞的基因组，进行长时间稳定表达 是制备细胞的基因组，进行长时间稳定表达 是制备细胞的基因组，进行长时间稳定表达 是制备shRNA 细胞 株和进行体内实验 (in vivo) 的最有效手段。 目前我们能够为客户提供从载体构建到慢病毒包装纯化和检测的一站式服务； 同时公司还在高效慢病毒生产技术的基础上建立并完善了载体制备转因动物实验。
2、慢病毒载体构建包装实验流程如下： 慢病毒载体构建包装实验流程如下： 慢病毒载体构建包装实验流程如下： 慢病毒载体构建包装实验流程如下： 慢病毒载体构建包装实验流程如下： 慢病毒载体构建包装实验流程如下： 慢病毒载体构建包装实验流程如下： 慢病毒载体构建包装实验流程如下： 慢病毒载体构建包装实验流程如下：
1. 根据目的基因相关信息（序列，号等），构建含有外源或重组载 根据目的基因相关信息（序列，号等），构建含有外源或重组载 根据目的基因相关信息（序列，号等），构建含有外源或重组载 根据目的基因相关信息（序列，号等），构建含有外源或重组载 根据目的基因相关信息（序列，号等），构建含有外源或重组载 体；
2. 对于测序正确的重组质粒，提取和纯化高量（不含内毒素）；
3. 使用高效重组载体和慢病毒包装质粒共转染 29 3T 细胞，进行病毒包装并收集上清 液；
4. 通过超滤和速离心浓缩纯化病毒；
5. 用病毒液感染 293T 细胞，测定病毒滴度；
用高质量 的病毒液感染靶细胞，通过定PCR 或者 Westenblot 检测目的基因表达，也可以 进

3、 RNAi 与慢病毒载体技术服务：
近年来的研究表明，将与mRNA对应的正义RNA和反义RNA组成的双链RNA(dsRNA)导入细胞，
可以使mRNA发生特异性的降解，导致其相应的基因沉默。这种转录后基因沉默机制(PTGS)
被称为RNA干扰（RNAi）。通过构建RNAi表达载体制备shRNA(发卡结构小干扰RNA)，已成为进
行RNA干扰实验的常用手段之一。 而目前为了感染原代细胞和难感染的细胞系或者在动物水
平进行RNAi，研究科学家更多的选择了慢病毒载体。在RNAi的研究中，为了感染原代细胞和
难感染的细胞系，科学家开始借助于病毒载体实现RNAi；由于慢病毒可以同时感染分裂和非
分裂细胞、整合性以及免疫原性低等优点，目前在RNAi的研究中，基于慢病毒构建的shRNA
被最广泛的使用。

本中心常期承接慢病毒，腺病毒，RNAi，WB，QPCR，RT-PCR，EMSA，
蛋白表达，抗体制备，蛋白组学，质谱分析，基因芯片，microRNA
研究系列，原代培养，动物实验，鸭乙肝新药筛选，心脑血管病新药
研究，新药药理学实验，以及医学SCI相关翻译、修改、代投服务等。