甲基化检测　　

服务编号	服务项目	介绍	价格	周期
DME01	MSP法	甲基化特异性PCR方法定性检测特定 　甲基化位点	350元/样本	1-2周
DME02	BSP-克隆测序法	扩增产物克隆后测序，检测甲基化序列	询价	2-4周
DME03	HRM法检测	高分辨溶解曲线方法检测甲基化程度	询价	1-2周
DME04	引物设计与合成	设计用于MSP或BSP的引物	询价	1-2周

 

 

图1　不同甲基化程度的样品（0%到100%）的HRM熔解曲线

 

送样要求：

　　细胞（≥10⁶ 个）、组织（≥300mg）、血液（≥1ml）、血清（≥1.5ml）等样品材料，基因组DNA（体积≥20μl，浓度≥50 ng/μl）。

提供结果：

 

服务编号	内容
DME01	引物序列、实验报告、包括MSP产物的电泳图片
DME02	引物序列、测序峰图、阳性克隆质粒和实验报告
DME03	扩增曲线、熔解曲线及实验报告

 

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名称	品牌	规格	说明
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热启动Taq酶	Microread	250/500/1000U，2.5U/μl	化学修饰，热启动，特异性极好， 　性价比很高
基因组DNA提取试剂盒	Microread	50/100次	离心柱型，纯度更高

１．甲基化特异性的PCR（Methylation-specific PCR，MSP）
　　用亚硫酸氢盐处理基因组DNA，所有未发生甲基化的胞嘧啶被转化为尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶不变；随后设计针对甲基化和非甲基化序列的引物进行PCR。通过电泳检测MSP扩增产物，如果用针对处理后甲基化DNA链的引物能得到扩增片段，则说明该位点存在甲基化；反之，说明被检测的位点不存在甲基化。

２．亚硫酸氢盐测序法（Bisulfite sequencing PCR，BSP）
　　用亚硫酸氢盐处理基因组DNA，则未发生甲基化的胞嘧啶被转化为尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶不变。随后设计BSP引物进行PCR，在扩增过程中尿嘧啶全部转化为胸腺嘧啶，最后对PCR产物进行测序就可以判断CpG位点是否发生甲基化称为BSP-直接测序方法。将PCR产物克隆至载体后进行测序，可以提高测序成功率，这种方法称为BSP-克隆测序法。

３．高分辨率熔解曲线法（High Resolution Melting，HRM）
　　在非CpG岛位置设计一对针对亚硫酸氢盐修饰后的DNA双链的引物，这对引物中间的片段包含感兴趣的CpG岛。若这些CpG岛发生了甲基化，用亚硫酸氢盐处理后，未甲基化的胞嘧啶经PCR扩增后转变成胸腺嘧啶，而甲基化的胞嘧啶不变，样品中的GC含量发生改变，从而导致熔解温度的变化（图1）。