细胞克隆形成实验

实验介绍 

当单个细胞在体外增殖6代以上，其后代所组成的细胞群体，成为集落或克隆。每个克隆含有50以上的细胞，大小在0.3-1.0mm之间。集落形成率表示细胞的独立生存能力。各种理化因素可能导致细胞的克隆形成能力发生改变。通过一定的实验方法可以对细胞的克隆形成能力进行检测。

实验方法：

平板集落形成实验、软琼脂集落形成实验

 (a) 平板集落形成实验：本法适用于贴壁生长的细胞和正常培养的细胞

 (b) 软琼脂集落形成实验：本法适用于非锚着依赖性生长的细胞，如骨髓造血干细胞、肿瘤细胞株、转化细胞系。

注意事项：

 (a) 琼脂对热和酸不稳定，若反复加热，容易降解而产生毒性，且硬度下降。因此高压灭菌后应进行分装；

 (b) 细胞在进行克隆形成实验时要求有95%以上的分散度，否则结果的准确度会受到很大影响；

 (c) 软琼脂与细胞混合时温度不能超过40℃，否则将会烫伤/死细胞；

 (d) 接种时细胞密度适度，不可过高。

细胞在低密度、非贴壁状态条件下培养，生存率明显下降，永生细胞系/株克隆形成率可达到10%以上，但初代培养细胞和有限传代细胞系克隆形成率仅为0.5%-5%，甚至无法形成单个克隆。因此，为了提高克隆形成率，有时需要在培养基中添加胰岛素、地塞米松等促克隆形成物质。

细胞接种存活率只表示接种细胞后贴壁的细胞数，但贴壁后的细胞不一定每个都能增殖和形成克隆。而形成克隆的细胞必为贴壁和有增殖活力的细胞。克隆形成率反映细胞群体依赖性和增殖能力两个重要性状。由于细胞生物学性状不同，细胞克隆形成率差别也很大，一般初代培养细胞克隆形成率弱，传代细胞系强；二倍体细胞克隆形成率弱，转化细胞系强；正常细胞克隆形成率弱，肿瘤细胞强。并且克隆形成率与接种密度有一定关系，做克隆形成率测定时，接种细胞一定要分散成单细胞悬液，直接接种在碟皿中，持续一周，随时检查，到细胞形成克隆时终止培养。

收费标准

服务周期：1-2个月

更多实验技术服务请见中心网站，或来电询洽！

本平台常期承接：
       慢病毒，腺病毒，RNAi类，细胞生物学整体实验，骨髓间充质干细胞培养、心肌细胞培养，蛋白组学类（iTRAQ），裸鼠成瘤类，分子生物学类，抗体制备类，芯片类，病理类，整体课题等各项实验技术服务。
        以及课题设计，基金标书撰写，医学SCI评估、翻译、润色以及协助发表。

联系我们：
地址：重庆市沙坪坝三峡广场利得尔大厦A座8楼
全国免费热线：400-675-6758
实验咨询及预约：023—65316016,023—65316556
Email:huameixinan@163.com，western-2@163.com
网址：www.cqwestern.com
咨询QQ:1029803407  1765803965   363819993