分子克隆和质粒载体构建

分子克隆的相关载体：

DNA片段的克隆需要合适的载体，载体或是质粒，或是噬菌体，或是病毒，通常大多经过人工改造。作为载体必须具备两条件：一是该载体在细胞内必须能自主复制，即必须具备复制原点；二是该载体必须具备适合的酶切位点，且这些酶切位点不在复制原点区域内。以上两条，保证了载体的可繁殖性和可利用性。为了便于获得阳隆克隆，载体上常有筛选标记，如对抗菌素的抗性，某些基因产物的显色反应等。

服务要求：

1、请以Email等形式告知我们服务的主要目的及具体要求。

2、提供外源DNA的来源及背景资料。DNA来源包括：PCR扩增产物；RT－PCR扩增产物；从其它质粒上酶切得到的DNA片段等。

3、提供DNA片段的电泳照片，并请标明Marker有浓度。

4、提供载体来源与背景资料。

5、注明克隆使用的酶切位点以及是否需要平端连接等。

相关材料说明：

1、对于实验材料中涉及病原体等危险材料不接受。

2、实验中涉及的碱基序列请以EMAIL的形式发到我中心。

3、实验中的使用载体要尽量提供背景资料：（质粒大小，抗性，拷贝数，多克隆位点等）如果是商品化载体，请您提供生产厂家及标准名称；如果所提供载体是您自己构建的请注明大体结构情况。

4、我中心可以提供常用的如（氨苄青霉素，氯霉素，卡那霉素）以外的抗生素需您提供。

5、您自己提供的引物如果为干品，请您标注具体的OD数，如果是液体态，请您标明浓度。

6、可以用甘油菌和穿刺菌形式邮寄菌体。（最好同时提供相应的质粒）；如果提供质粒，则质粒的量最好在4ug以上；如果提供的是PCR产物，则PCR产物量最好在5u以上（最好附上电泳图）

7、用于提取RNA/DNA的材料要新鲜。采样时应首先在液氮中速冻，保存在－80度的冰箱中，使用干冰运输。

结果提供：

1、相关的实验说明和相关的酶切图片。

2、测序的结果。

3、构建好的载体和菌液各一份。

4、如有鉴定的客户提供PCR鉴定图片。

实验完成时间：

1个月以内

本平台常期承接：
       慢病毒，腺病毒，RNAi类，细胞生物学整体实验，骨髓间充质干细胞培养、心肌细胞培养，蛋白组学类（iTRAQ），裸鼠成瘤类，分子生物学类，抗体制备类，芯片类，病理类，整体课题等各项实验技术服务。
        以及课题设计，基金标书撰写，医学SCI评估、翻译、润色以及协助发表。

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