凝胶迁移或电泳迁移率（EMSA）

实验技术对外服务

凝胶迁移或电泳迁移（EMSA）原理：

凝胶迁移或电泳迁移率实验（EMSA）是一种研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用的技术，可用于定性和定量分析。这一技术最初用于研究DNA结合蛋白，目前已用于研究RNA结合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。通常将纯化的蛋白和细胞粗提液和32P同位素标记的DNA或RNA探针一同保温，在非变性的聚丙烯凝胶电泳上，分离复合物和非结合的探针。DNA-复合物或RNA-复合物比非结合的探针移动得慢。同位素标记的探针依研究的结合蛋白的不同，可是双链或者是单链。当检测如转录调控因子一类的DNA结合蛋白，可用纯化蛋白，部分纯化蛋白，或核细胞抽提液。在检测RNA结合蛋白时，依据目的RNA结合蛋白的位置，可用纯化或部分纯化的蛋白，也可用核或胞质细胞抽提液。竞争实验中采用含蛋白结合序列的DNA或RNA片段和寡核苷酸片段（特异），和其它非相关的片段（非特异），来确定DNA或RNA结合蛋白的特异性。在竞争的特异和非特异片段的存在下，依据复合物的特点和强度来确定特异结合。

主要仪器：

高速组织捣碎机： SWISS KINEMATIC Ltd. Co（型号：PT1600E）

电泳仪：北京六一仪器厂（型号：DYY-8C）

电泳槽：北京六一仪器厂（型号：DYCZ-24D）

转印槽：北京六一仪器厂（型号：DYCZ-40D）

低温高速离心机：湖南湘仪公司（型号：H2050R）

超低温冰箱：美国FORMA公司（型号：702）

分光光度计：上海分析仪器总厂（型号：721）

脱色摇床：上海琪特分析仪器有限公司（型号：STS-2）

 

主要试剂：

蛋白质预染分子量marker(118,90,48,36,27,20kd)：Fermentas

NC膜：Millipore公司（型号：0.45um）

化学发光底物：PIERCE公司

电泳类生化试剂均为美国amresco公司产品

其他生化试剂为国药集团上海化学试剂公司产品

总蛋白测定试剂盒：南京建成生物工程研究所

NF-KB探针：由Invitrogen公司合成与标记

成像系统：富士FLA-5000全功能激光影像成像系统

EMSA实验步骤：

1.探针的标记：

2、 探针的纯化：

3、EMSA 胶的配制：

4、EMSA结合反应：

5、 电泳分析：

客户需知：

方法：     同位素Ｐ^３２标记探针/生物素/荧光素标记/进行检测。

技术要点：　实验过程包括核蛋白的提取，同位素标记/生物素/荧光素标记/与纯化，凝胶电泳，胶片暴光等。在ＥＭＳＡ操作中会用到同位素，要注意实验室环境和实验员的保护。

客户提供：细胞　２５ＭＬ的细胞瓶培养的细胞。　组织　２００mg－４００mg

探针　自备探针。　　

 

完成时间：　　３－４个星期。

 

结果交付：　　详细实验步骤，和实验图片。

 

本平台常期承接：
       慢病毒，腺病毒，RNAi类，细胞生物学整体实验，骨髓间充质干细胞培养、心肌细胞培养，蛋白组学类（iTRAQ），裸鼠成瘤类，分子生物学类，抗体制备类，芯片类，病理类，整体课题等各项实验技术服务。
    以及课题设计，基金标书撰写，医学SCI评估、翻译、润色以及协助发表。

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